Mutational and functional analysis of the Sly1 protein, an essential component of the vesicular transport machinery

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In eukaryotischen Zellen sind die Proteine Sec1p/Munc18 (SM) essentiell für Membranfusionen. Sly1p, ein Protein der SM-Familie, agiert im anterograden Transport zwischen dem Endoplasmatischen Retikulum und dem frühen Golgi und ist evolotionär hoch konserviert. In dieser Arbeit wurde ein strukturbasierter Mutations-Screen angewendet, um die Funktion des SM- Proteins Sly1p in Hefe zu untersuchen. Vor Beginn dieser Arbeit waren außer dem im ER und Golgi vorkommenden Syntaxinen Ufe1p und Sed5p keine weiteren Bindungspartner von Sly1p bekannt. In dieser Studie konnten spezifische “nonsyntaxin“ SNAREs als neue Bindungspartner identifiziert werden. Im Besonderen wurde eine entscheidende, vorher nicht bekannte Rolle von Sly1p im retrograden Golgi-ER-Transport aufgedeckt. Zusätzlich wurden zwei neue dominante SLY1-Mutationen, die die essentielle Funktion des GTPase Ypt1p umgehen, identifiziert und charakterisiert. Es konnte zudem gezeigt werden, dass beide SLY1-Allele ebenfalls spezifisch die Funktion der Ypt6-GTPase, die im retrograden Transport involviert ist, umgehen. Die Kopräzipitation dieses mutanten Sly1-Proteins mit “nonsyntaxin“ SNAREs war signifikant reduziert. Aus diesen Ergebnissen kann man schließen, dass Sly1p funktionell mit den GTPasen Ypt1p und Ypt6p interagiert und möglicherweise zu der spezifischen Zusammenlagerung von SNARE-Komplexen führt.